Dados do Trabalho

Título

Abordagem Fenotípica Utilizando Esferoides Cardíacos em Triagens de Medicamentos para a Doença de Chagas

Introdução

Causada pelo Trypanosoma cruzi (T. cruzi), a doença de Chagas (DC) é considerada um sério problema de saúde pública, afetando mais de 6 milhões de pessoas no mundo, sobretudo em áreas pobres da América Latina. O tratamento inclui dois nitroderivados o benznidazol (Bz) e o nifurtimox que apresentam sérias limitações quanto a eficácia e segurança, apoiando a busca de novas alternativas terapêuticas. Outro gargalo é que, apenas 1% dos acometidos possuem acesso ao tratamento. Ademais, são necessários protocolos experimentais mais precisos (ex.: uso de matrizes celulares 3D) a fim de reduzir as lacunas de tradução encontradas entre ensaios in vitro e in vivo assim como de pré-clínicos e clínicos.

Objetivo (s)

O objetivo foi utilizar esferóides para avaliar a toxicidade sobre células hospedeiras e a atividade anti-T.cruzi do Bz, explorando seu efeito na liberação de mediadores inflamatórios. 

Material e Métodos

Para avaliação de toxicidade, culturas cardíacas 3D não infectadas foram incubadas por 48 horas (h) a 37°C com concentrações crescentes de Bz (até 200μM). A morfologia foi avaliada por microscopia de luz e a viabilidade celular determinada usando os testes PrestoBlue® (CC) e WST-1. Os esferoides foram infectados com formas sanguíneas de T.cruzi (cepa Y, razões variáveis de 5 a 40:1 de par:célula) e incubados por 96 h/37°C com Bz (0–2,5μM). A determinação da potência (EC50) foi avaliada pela análise da carga parasitária por qPCR. O parasitismo nos esferoides foi também monitorado por microscopia de fluorescência utilizando o corante DAPI. O perfil de mediadores inflamatórios nos sobrenadantes das culturas 3D foi avaliado por citometria de fluxo (kit CBA). 

Resultados e Conclusão

A análise pelos testes de viabilidade celular demonstrou ausência toxicidade do Bz sobre os modelos 3D (LC50 >200μM). A observação ao microscópio de fluorescência revelou a presença intracelular dos parasitas nos esferoides cardíacos. Os dados da qPCR conformaram a ação antiparasitária in vitro do Bz (EC50 = 0,99μM). A avaliação dos mediadores inflamatórios liberados no sobrenadante celular revelou aumentos nos níveis de IL-6 e TNF (aproximadamente 190 e 25 vezes, respectivamente) em esferoides infectados. A administração de Bz a 10μM reduziu a carga parasitária em >90%, resultando em um declínio concomitante nos níveis de IL-6 (36%) e TNF (68%). Os resultados reforçam a relevância do uso de matrizes cardíacas 3D na identificação in vitro de novos agentes antiparasitários e o possível impacto sobre a fisiologia das células hospedeiras.

Palavras Chave

Doença de Chagas; Trypanosoma cruzi; Cultura tridimensional; Quimioterapia experimental.