Dados do Trabalho

Título

Análise transcriptômica do PBMC de pacientes com reações hansenícas do tipo I (RR) e II (ENH)

Introdução

Introdução: A hanseníase é uma doença infectocontagiosa crônica causada pelo bacilo Mycobacterium leprae, com mais de 200.000 novos casos relatados mundialmente por ano. As reações hansenícas, reação reversa (RR) e eritema nodoso Hansênico (ENH), são sintomas de aumento da atividade da doença com piora clínica que pode ocorrer abruptamente antes durante ou após a conclusão do tratamento. Entender como essas reações são reguladas é essencial para busca de tratamentos mais efetivos.

Objetivo (s)

Objetivo: Identificar através de um estudo do transcriptoma em cultura de células estimuladas pelo M.leprae a expressão dos principais genes nas reações.

Material e Métodos

Metodologia: Células de pacientes hansênicos com RR e ENH, ambos os sexos, foram coletadas e estimuladas com antígeno sonicado de M.leprae por 18h. A extração de mRNA foi feita pelo método do TRIzol (Life Technologies). As bibliotecas foram construídas a partir de 200 ng de RNA total com o kit TruSeq Stranded Total RNA Prep Globin. Os dados foram analisados pelo programa BCL Convert versão 3.8.4. As contagens de leituras por transcrito foram obtidas com Salmon versão 1.10.1. O índice para o mapeamento com Salmon foi construído com o transcriptoma do GENCODE com genoma de referência humano GRCh38. Análises e gráficos foram realizados pelo programa EdgeR, implementado pelo programa R.

Resultados e Conclusão

Resultados: Na RR foram mais expressos os genes IDO1, CALHM6, GBP5, ANKRD22, CD274, IL15RA, ETV7, CCL8, GBP4 e APOL4. Esses genes estão correlacionados a regulação positiva do processo do sistema imunológico, do processo apoptótico de células T e de linfócitos, resposta celular ao INF tipo II e uma regulação negativa da produção de IL-10. Sendo modulados os seguintes genes foram observados VSIG4, RPL7AP64, EPS8, SCARB1, IQCD, IMPA2, NHS, HGF, SLC46A1, EPHB2 os quais estão envolvidos nos processos de transporte transmembrana, digestão e absorção de vitaminas. Já no ENH os genes GCKR, SERPINB7, C2CD4B, IL12B, PTGS2, TM4SF1, GAPDHP49, IL23A, CSF2, BAALC-AS1 tiveram a expressão aumentada. A expressão desses genes está principalmente ligada ao aumento da proliferação de células do sistema imune como células NK, células T de memória, célula T-helper 17 e macrófagos/granulócitos. Conclusão: Com a ajuda do transcriptoma, identificamos genes ligados a ativação da resposta inflamatória, com destaque para resposta celular ao INF tipo II e apoptose nas reações hansenícas. Na RR há uma regulação negativa de IL10.

Palavras Chave

Hanseníase; Reação hansenícas; transcritoma; Cultura celular; Expressão gênica.