Dados do Trabalho

Título

ESTUDO DA MORFOLOGIA E MORFOGÊNESE DO VÍRUS ILHÉUS EM UM MODELO IN VITRO

Introdução

O vírus Ilhéus (ILHV) é um arbovírus negligenciado que pertence ao gênero orthoflavivírus e a família flaviviridae. O ciclo de transmissão desse vírus ocorre entre aves e mosquitos de variadas espécies, porém, anticorpos já foram detectados em uma ampla gama de hospedeiros silvestres e em humanos. Os casos em humanos ocorrem com certa periodicidade principalmente na América Latina, indicando o potencial epidêmico deste patógeno. De todos os países com casos relatados, o Brasil é o que apresenta a grande maioria dos casos com presença de quadros clínicos. Os orthoflavivírus durante a infecção nas células induzem a diversas mudanças morfológicas e celulares. Essas alterações estão relacionadas tanto ao processo de replicação, quanto à estruturas que se formam a partir do dano celular. Entretanto, embora tenham-se dados mais claros na literatura para outros orthoflavivírus, a relação entre o ILHV e a formação dessas estruturas, seu ciclo replicativo e alterações celulares é desconhecida.

Objetivo (s)

Um dos principais objetivos desse trabalho é caracterizar as principais alterações morfológicas e ultraestruturais em células epiteliais de rim de macaco verde (Vero) infectadas, além de mapear seu ciclo de replicação, estrutura do vírion e do genoma.

Material e Métodos

Para cumprir estes objetivos monocamadas de célula de linhagem Vero foram infectadas com MOI de 0,01 (multiplicity of infection) e coletadas 1, 2, 3, 24, 48, 72 e 96 horas pós-infecção (h.p.i.). Os efeitos citopáticos (CPE) nas monocamadas foram avaliados por microscopia de campo claro. Para a análise ultraestrutural, todos os pontos de infecção foram analisados usando um microscópio eletrônico de transmissão Hitachi HT 7800. O RNA de um dos sobrenadantes foi extraído e realizado o sequenciamento genético do vírus.

Resultados e Conclusão

As análises por microscopia de campo claro demonstraram que os CPEs são visíveis principalmente após o terceiro dia de infecção. Além disso, as análises ultraestruturais corroboram que o ILHV é capaz de induzir a formação de vesículas de dupla membrana, membranas convolutas e pacotes vesiculares. Essas estruturas, semelhantes às observadas nos vírus Zika (ZIKV) e da Dengue (DENV), constituem complexos de replicação que auxiliam no processo replicativo do ILHV nas células. Nossos resultados preliminares revelam que a infecção pelo ILHV induz uma citopatogênese semelhante às observadas em estudos in vitro para outros orthoflavivírus.  

Palavras Chave

Ilhéus; Arbovirus; Ultraestrutura; Orthoflavivirus.