Dados do Trabalho

Título

Avaliação da expressão proteica diferencial de Mycobacterium tuberculosis após tratamento com uma molécula oxadiazólica

Introdução

A busca de novos fármacos contra tuberculose tem se tornado cada vez mais relevante, com intuito de encontrar fármacos que sejam mais seguros, e efetivos contra cepas resistentes. Desse modo, nosso grupo de pesquisa vem estudando compostos oxadiazólicos, os quais tem se mostrado promissores. Portanto, a compreensão do modo de ação dessas substâncias tem se tornado necessária.

Objetivo (s)

Avaliar a expressão proteica diferencial de Mycobacterium tuberculosis após exposição à substância oxadiazólica (Hit 6n).

Material e Métodos

Um cultivo de M. tuberculosis H37Rv em Middlebrook 7H9 enriquecido com OADC foi incubado por 10 dias a 37°C sob agitação e exposto à substância 6n na concentração de ½ CIM (Concentração Inibitória Mínima) por 24 e 48 h nas mesmas condições. Uma suspensão sem tratamento foi utilizada como controle. Após esse período, as suspensões foram lavadas e inativadas por meio do banho maria a 80°C por 30min, e posteriormente com o auxílio do tampão de lise e sonicador. Em seguida foram dessalinizadas (Amicon®Ultra-0.5 mL), e as proteínas quantificadas por SDS-PAGE. Para análise das amostras no cromatógrafo acoplado ao espectrômetro de massas (LC-MS), as proteínas foram digeridas (tripsina) e dessalinizadas (coluna C18 ZipTip (Milipore)). Após análise no equipamento os dados foram gerados e seu processamento foi realizado pelos softwares MaxQuant®, Perseus® e Metaboanalyst®. Para a compreensão das proteínas encontradas e suas funções foi utilizado Uniprot®, Mycobrowser® e String®.

Resultados e Conclusão

De acordo com a análise estatística foram encontradas no total 1.806 proteínas, no qual 36 tiveram diferença significativa (p<0,05) entre os grupos. Dentre elas, 24 proteínas estavam reguladas positivamente nos grupos de tratamento (24 e 48 h). Por meio das análises dos dados podemos notar que apesar de não apresentarem muitas associações entre elas, se enquadravam principalmente na classe de proteínas de metabolismo intermediário e respiração (43%), e de proteínas que ainda não foram muito bem caracterizadas (19%). Dessa forma, podemos concluir que grande parte das proteínas identificadas que estavam alteradas nos grupos 24 e 48 h estavam relacionadas a processos metabólicos ligados a respiração celular, o que sugere que o modo de ação da molécula hit6n.

Palavras Chave

Fármaco anti-TB; mecanismo de ação; oxadiazóis