Dados do Trabalho

Título

Aprimorando o diagnóstico da leptospirose: utilização dos métodos de MALDI-TOF e PFGE para verificação das cepas utilizadas no teste de microaglutinação (MAT)

Introdução

O teste de referência para o diagnóstico da leptospirose é o MAT, que é confirmatório da doença e fornece o provável sorogrupo infectante. É um teste complexo que necessita da manutenção de sorovares de leptospiras vivas. No Instituto Adolfo Lutz (IAL) são utilizados como antígenos 20 sorovares de leptospiras no MAT e essas cepas são mantidas em meio líquido com repiques semanais. Problemas podem surgir devido aos repiques constantes, entre eles a contaminação cruzada entre os diferentes sorovares.

Objetivo (s)

Avaliar a qualidade dos antígenos utilizados no teste de MAT realizado do IAL, por meio da verificação das cepas.

Material e Métodos

Das 20 cepas avaliadas, 19 foram fornecidas pela coleção de leptospiras da FIOCRUZ-RJ e uma pela coleção de cultura do IAL. As 20 cepas foram analisadas por espectrometria de massa MALDI-TOF (Bruker Daltonics), com utilização do banco de dados MicrobeNet (CDC, USA). As mesmas cepas foram submetidas à eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) com análise das bandas geradas pela enzima NotI, no software BioNumerics (Applied Maths). A identificação das cepas foi realizada por comparação com a biblioteca de PFGE referência do CDC.

Resultados e Conclusão

Houve identificação correta das espécies de 18 das 20 cepas pelos MALDI-TOF; as outras duas não foram identificadas porque não constam no banco. Já pelo PFGE, as 20 cepas foram corretamente identificadas em nível de sorogrupo. Após um ano do estabelecimento do banco local no Bionumerics, os testes de MALDI-TOF e PFGE foram repetidos e os mesmos resultados foram observados, indicando que houve manutenção correta das cepas utilizadas no teste de MAT. O uso do MALDI-TOF pode ser útil para identificar, ao menos presuntivamente, a maioria das cepas do MAT. No entanto, a confirmação com PFGE se torna indispensável para caracterização dos sorogrupos. A verificação regular das cepas usadas no MAT apresenta grande relevância para garantir a qualidade do teste, aprimorar o diagnóstico da doença e o monitoramento dos prováveis sorogrupos circulantes. Nossa proposta é que essa verificação seja realizada pelo menos uma vez ao ano.

Palavras Chave

Leptospirose; MAT; leptospiras; MALDI-TOF; PFGE