Dados do Trabalho

Título

AVALIAÇÃO DO EFEITO DA PIRFENIDONA EM MODELO IN VITRO DE FIBROSE CARDÍACA DURANTE A INFECÇÃO DE ESFEROIDES/ORGANOIDES PELO TRYPANOSOMA CRUZI

Introdução

A doença de Chagas (DC) é uma doença parasitária bifásica com significativa morbimortalidade. As manifestações cardíacas são as mais relevantes, por ocasionar o desenvolvimento de fibrose e hipertrofia no tecido, podendo culminar em infarto do miocárdio e morte. No momento, ainda não existem tratamentos para a fibrose cardíaca. Estudos têm utilizado como abordagem o reposicionamento e a combinação de compostos na busca de anti-fibróticos para doenças negligenciadas. A Pirfenidona é um anti-fibrótico já utilizado contra a fibrose pulmonar idiopática e a literatura vem reportando seus efeitos também no contexto cardíaco. Sistemas de cultura tridimensional (3D) reproduzem o ambiente in vivo mais fidedignamente. Nosso grupo estabeleceu um modelo 3D do tipo esferoide/organoide que mimetiza a fibrose e hipertrofia após a infecção com o Trypanosoma cruzi (T. cruzi). 

Objetivo (s)

Buscamos avaliar o efeito da Pirfenidona sobre a fibrose induzida pela infecção com o T.cruzi nos esferoides cardíacos. 

Material e Métodos

Para isso, produzimos esferoides a partir de culturas primárias de corações de Swiss Webster (CEUA: L-020/2022-A3). Posteriormente, estes foram infectados com o T.cruzi cepa Y (MOI de 20) por 144h (período dentro do qual a fibrose e hipertrofia se estabelecem), tratados com a Pirfenidona por 72h e por fim, analisados.

Resultados e Conclusão

A cultura foi caracterizada por microscopia de contraste de fase, verificando-se que os esferoides apresentavam contratilidade espontânea e mesmo diâmetro ao longo dos dias de cultura. Nos ensaios de infecção, foi observada parada da contratilidade em 24h, aumento do diâmetro e da produção de proteínas de matriz extracelular após 144h de infecção, por microscopia de contraste de fase e imunofluorescência. A avaliação da Pirfenidona sobre a viabilidade dos esferoides utilizando o kit CellTiter-Glo 3D demonstrou que a concentração de 1mM por 72h não ofereceu citotoxicidade, observado também por análise morfológica utilizando microscopia de contraste de fase. Por fim, verificamos que a droga reduziu o tamanho dos esferoides infectados, o que pode estar relacionado com sua ação anti-fibrótica, uma vez que ela também induziu a redução da expressão de proteínas de matriz (fibronectina, laminina e colágeno-I) nesses esferoides, visto por imunofluorescência. Além disso, o tratamento também não demonstrou efeito sobre a carga parasitária, observado por qPCR e imunofluorescência. Esperamos contribuir com a elucidação de novas estratégias terapêuticas contra a fibrose cardíaca na DC.    

Palavras Chave

Doença de Chagas; Fibrose cardíaca; Esferoides