Dados do Trabalho

Título

Criação de ensaios moleculares para a identificação de espécies causadoras de Leishmaniose Tegumentar Americana no estado do Amazonas.

Introdução

As leishmanioses são doenças infecciosas causadas por protozoários do gênero Leishmania. Na cidade de Manaus foi responsável por mais de 60% dos casos de LTA no estado do Amazonas, sendo que a maioria dos pacientes era da região metropolitana de Manaus e das regiões localizadas nas rodovias AM – 010 e BR – 174. Sendo a L. guyanensis é o principal agente etiológico da LC no estado do Amazonas . O uso de técnicas moleculares tornou-se cada vez mais relevante devido à sua alta sensibilidade e especificidade. Portando, a correta identificação de espécies de leishmanias por uma técnica molecular, in house, a ser desenvolvido no laboratório de biologia molecular da Fundação Alfredo da Matta (FUAM).

Objetivo (s)

O presente estudo teve como objetivo desenvolver e validar novos alvos moleculares como método mais sensível e especifico para o diagnóstico da leishmaniose.  

Material e Métodos

O estudo se caracteriza como analítico observacional, transversal e prospectivo na Fundação Alfredo da Matta (FUAM), em Manaus, município do estado do Amazonas com aprovação pelo comitê de ética da FUAM. Usando técnicas de biologia molecular com sondas (TaqMan) para os genes ITS1 e HSP70.

Resultados e Conclusão

A detecção e identificação das espécies de Leishmania foi desenhado por meio de um sistema TaqMan Real-Time PCR, utilizando primers e sondas projetadas para dois alvos gênicos (HSP70 e ITS-1), que determinam o subgênero e espécie, respectivamente. Este novo protocolo molecular foi aplicado em pacientes com suspeita de leishmaniose no Amazonas. Foram recrutados 253 pacientes com suspeita da doença, sendo 226 confirmados pelos sistemas desenvolvidos, 96% (218) eram do subgênero Viannia e 4% (8) Leishmania. Desses casos, 86.28% (195) eram causados pela espécie L. guyanensis, 8.85% (20) L. braziliensis e 4.87% espécies raras como L. amazonensis (8), L lainsoni (2) e L. naiffi (1). Todas as amostras foram sequenciadas por meio de um fragmento de 234pb do gene HSP70 altamente polimórfico, ideal para discriminação de espécies. Este estudo proporcionou a implantação na rotina da FUHAM um sistema de diagnostico seguro, rápido, sensível, específico, com habilidades quantitativas por meio da devida identificação de leishmanias., em pacientes atendidos no SUS. Também foi possível afastar o diagnóstico clínico da leishmaniose nos pacientes com o teste molecular negativo para a doença, e, com isso, permitir que os clínicos procurem outras patologias que podem ser confundidas com a leishmaniose.  

Palavras Chave

leishmaniose; qPCR in house; identificação de espécies