Dados do Trabalho

Título

Novo antígeno quimérico derivado de proteínas nativas de Leishmania infantum com potencial para uso na triagem diagnóstica da Leishmaniose visceral em humanos e cães

Introdução

O monitoramento e controle adequado da Leishmaniose Visceral (LV) ainda depende de novos métodos diagnósticos mais eficientes e de menor custo, voltados a detecção da doença em humanos e no cão doméstico. Os testes disponíveis para LV no mercado brasileiro, ainda usam extrato bruto de Leishmania ou, em geral, utilizam antígenos ou proteínas recombinantes importadas, com variações significativas na precisão dos resultados. Atualmente, não há nenhum teste validado para identificar humanos e cães positivos para LV.

Objetivo (s)

Assim, propomos a validação de um primeiro teste rápido baseado em um antígeno quimérico recombinante construído a partir de fragmentos de diversas proteínas de Leishmania infantum com potencial para uso no diagnóstico sorológico da LV em humanos e cães, incluindo cães assintomáticos.

Material e Métodos

O desenho do novo gene quimérico foi baseado na modificação do gene codificante de uma proteína precursora, chamada de Q5, incluindo novos fragmentos proteicos relevantes do ponto de vista antigênico. A nova proteína foi produzida em bactérias, purificada por afinidade e avaliada por ELISA e no teste rápido imunocromatográfico de fluxo lateral.

Resultados e Conclusão

Após a prova de conceito indicando bons resultados nos ensaios de ELISA, a nova proteína foi avaliada no teste rápido frente a amostras de cães positivos para LV, triadas pelo teste DPP e confirmadas pelo EIE-LVC, sendo, 44 cães sintomáticos, com sensibilidade de 95%, e 64 cães assintomáticos, com sensibilidade de 91%. Outros 37 cães saudáveis foram avaliados e atestaram 100% de especificidade (uso dos soros aprovados junto a CEUA/UPE sob registro nº 03/2020). Também foram testados soros humanos positivos para LV (n=75), confirmados pelos métodos parasitológico e ELISA (baseado em extrato bruto de Leishmania), com sensibilidade de 92%, e especificidade determinada em 100%, avaliada com 55 soros de indivíduos saudáveis. O novo teste não apresentou resultados falsos positivos em indivíduos positivos para leishmaniose tegumentar (n=9), dengue (n=7), Zika (n=2) ou doença de Chagas (n=2) (CEP - UFPI-0116/2005; CEP - 25000.119007/2002-03; CAEE 11083812.7.0000.5190). Um teste com essas potencialidades possibilitará um diagnóstico rápido e eficiente, aumentando as chances de cura dos animais e indivíduos acometidos pela LV. Além disso, ao atender uma demanda do SUS, esse tipo de teste trará um retorno sustentável para o sistema de saúde público. Este projeto contou com financiamento da FACEPE, CNPq, Bio-Manguinhos e INOVA-Fiocruz.          

Palavras Chave

Palavras-chave: Diagnóstico Sorológico; Proteína Quimérica Recombinante; imunodiagnóstico