Dados do Trabalho

Título

Criação de um algoritmo e comparação de amostragens para ensaios moleculares para a identificação de espécies causadoras de Leishmaniose no estado do Amazonas.

Introdução

As leishmanioses são doenças infecciosas causadas por protozoários do gênero Leishmania, sendo endêmicas em aproximadamente 98 países tropicais e subtropicais. Dependendo da espécie de Leishmania e as características do hospedeiro, a infecção pode ser assintomática ou um espectro de doenças, tais como a leishmaniose cutânea, mucocutânea e visceral. No novo mundo (Américas), múltiplas espécies do subgênero Leishmania e Viannia  (L.) mexicana, L. (V.) braziliensis, L. (V.) panamensis, L. (L.) amazonensis, L. (V.) guyanensis entre outras) são responsáveis pelas infecções. 

Objetivo (s)

Desenvolver e elaborar um algoritmo com novos alvos moleculares para determinação do subgênero e espécies causadoras da LTA. Analisar a melhor amostra biológica (papel filtro e biópsia) na identificação de espécies;

Material e Métodos

Trata-se de um estudo baseado na criação de marcadores moleculares com o propósito de auxiliar a clínica no diagnóstico e identificação das espécies. Este estudo teve a aprovação do comitê de ética e pesquisa (CEP) da Fundação Hospitalar Alfredo da Matta (FUHAM).  Foram coletados 100 pacientes, sendo 50 amostras de biopsias e 50 de papel filtro. Foi realizada a extração de DNA e genotipagem por meio da qPCR, utilizando primers e sondas TaqMan para identificação de gênero e espécie. Foram realizados os testes de  A acurácia (sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo),  dos testes do padrão ouro e qPCR in house. Todas as análises foram realizadas por meio da ferramenta de bioestatística STATA v.13

Resultados e Conclusão

O Algoritmo desenvolvido para determinação de subgênero e espécies foi determinado por meio da detecção e identificação das espécies de Leishmania usando TaqManTM Real-Time PCR. Dos pacientes recrutados, 97% eram do subgênero Viannia e 3% Leishmania. Desses casos, 89% eram causados pela espécie L. guyanensis, 7% L. braziliensis e 4% espécies raras como L. amazonensis, L lainsoni e L. naiffi.  A comparação entre papel filtro e biópsias mostrou médias semelhantes, sem diferença significativa. Os dois ensaios moleculares criados por meio deste estudo  proporcionou a implantação na rotina da FUHAM,   de uma forma célere e eficaz aos pacientes de leishmaniose um diagnóstico, seguro, rápido, sensível e específico,  permitindo assim que o médico aplique o tratamento imediatamente, prevenindo o agravamento das lesões e cicatrizes no corpo.

Palavras Chave

leishmaniose; qPCR; Papel filtro; Biópsia; Algoritmo