Dados do Trabalho

Título

DESENVOLVIMENTO E AVALIAÇÃO DE UM NOVO ELISA INDIRETO MULTI-ESPÉCIE UTILIZANDO O ANTÍGENO RECOMBINANTE SWHEV CP2 PARA SORODIAGNÓSTICO DO VÍRUS DA HEPATITE E (HEV) EM HUMANOS E SUÍNOS

Introdução

A infecção pelo vírus da Hepatite E (HEV) é tipicamente aguda, mas pode se tornar crônica em imunodeprimidos. Sua detecção é crucial para o manejo adequado de pacientes e prevenção. Contudo, o acesso aos testes é limitado devido ao alto custo. Assim, desenvolver testes diagnósticos acessíveis é essencial para a vigilância epidemiológica em humanos e suínos, relevantes na transmissão zoonótica.  

Objetivo (s)

Neste contexto, o estudo propôs desenvolver e avaliar o desempenho do ELISA indireto multi-espécie utilizando antígeno recombinante para o sorodiagnóstico do HEV em humanos e suínos.

Material e Métodos

Dessa forma, o antígeno swHEV CP2 foi expresso e purificado para padronização e validação do ELISA in house. Amostras de soro de pacientes renais crônicos do Ceará (36579120.0.1001.5045) foram testadas com kits comerciais Anti-HEV IgG: específico (n= 341) e multi-espécie (n= 46). Além disso, 212 amostras de suínos de Pernambuco (90/2015) foram testadas com kits Anti-HEV IgG específico (n= 212) e multi-espécie (n= 95). Utilizou-se as amostras concordantes nos kits para produção da curva ROC. Ademais, construiu e obteve-se um gene quimérico com epítopos de células B. Em seguida, realizou-se a expressão em diferentes condições de temperatura e concentrações de IPTG, seguida da purificação.

Resultados e Conclusão

Para suínos, os kits exibiram concordância substancial, sendo 65,5% e 56,8% amostras IgG positivas (pos) nos kits específico e multi-espécie, respectivamente. O protocolo ideal do ELISA utiliza 250 ng do swHEV CP2 e diluição do soro 1:500. O teste exibiu 94% de sensibilidade (SEN), 100% de especificidade (ESP), valores preditivos pos de 100% e negativo (neg) de 89,6%, além de concordância quase perfeita e correlação pos com ambos kits. Para humanos, a concordância entre os kits foi substancial, com 3,5% amostras IgG pos no kit específico e 15,2% no multi-espécie. Os anticorpos anti-HEV reagiram com swHEV CP2 significativamente com mesmo protocolo. Para a espécie, o teste apresentou 94% de SEN, 66% de ESP e correlação pos moderada com ambos os kits comerciais. Devido ao resultado insatisfatório para humanos, obteve-se um antígeno quimérico, desenhado a partir de epítopos validados para células B, sendo determinadas as melhores condições de expressão e purificação. O ELISA indireto multi-espécie apresentou alta performance na detecção de anticorpos anti-HEV para suínos, diferente de humanos. Assim, obteve-se um novo antígeno quimérico visando aprimorar o desempenho do sorodiagnóstico do HEV em várias espécies.

Palavras Chave

hepatite E; Infecção zoonótica; Teste imunoenzimático; Antígeno quimérico recombinante; Imunodeprimidos.