Dados do Trabalho

Título

Avaliação da Atividade Imunomodulatória da Crotapotina de Crotalus durissus terrificus sobre PBMCs Humanos

Introdução

As proteínas derivadas de venenos de serpentes têm sido amplamente estudadas devido às suas variadas atividades biológicas, que incluem propriedades neurotóxicas, citotóxicas e imunomodulatórias. A crotapotina (CA) de Crotalus durissus terrificus é uma chaperona atóxica e estudos anteriores demonstraram que exibe atividade anti-inflamatória, afetando a resposta imunológica. Este estudo foca na crotapotina isolada, investigando sua potencial atividade imunomodulatória sobre células mononucleares de sangue periférico humano (PBMCs).

Objetivo (s)

O objetivo principal deste estudo foi avaliar a possível atividade imunomodulatória da crotapotina em PBMCs humanos. 

Material e Métodos

Foram utilizadas PBMCs humanas. As condições de incubação incluíram um controle negativo (RPMI), células tratadas com LPS, células tratadas com nigericina, e células tratadas com crotapotina nas concentrações de 25 mM e 50 mM. Os ensaios de ELISA (kits BD e RD) foram realizados para quantificação das citocinas IL-10 e IL-1β nos tempos de 6h, 12h, 24h, 48h e 96h. Ensaios de imunofluorescência foram conduzidos utilizando marcadores específicos para núcleo, citoesqueleto, formação de poros de gasdermina e liberação de IL-1β. Para investigar a produção de radicais livres, utilizou-se o ensaio DCFDA por espectrofotometria. A ativação de monócitos e linfócitos foi avaliada por citometria de fluxo (Citoflex). Ensaios bioquímicos de LDH foram realizados nos tempos de 30 e 60 minutos. Para as análises estatísticas foi utilizado o software GraphPad Prism Ver 7.04, considerando signficativos somente valores de p<0,05.

Resultados e Conclusão

Os ensaios de ELISA indicaram maior produção de IL-10 no tempo de 48h, nas células tratadas com LPS, enquanto a concentração de 50 mM de CA apresentou menor variação. Para IL-1β, observou-se maior  produção após 4h, com níveis superiores a 2000 pg/mL, sem diferença estatística significativa entre as diferentes concentrações de CA. Nos ensaios de imunofluorescência, observou-se a formação de poros de gasdermina e a liberação de IL-1β em células tratadas com CA, sugerindo a ativação da via inflamatória. O ensaio de DCFDA não indicou significância, sugerindo que a liberação de IL-1β não está associada à produção de radicais livres. A citometria de fluxo revelou que a CA ativa monócitos, sem alterar os linfócitos. Os ensaios bioquímicos de LDH não apresentaram alteração significativa, indicando baixa citotoxicidade. Os resultados indicam que a CA apresenta atividade imunomodulatória sobre os monócitos.

Palavras Chave

Crotapotina; PBMCs; Atividade imunomodulatória; Monócitos.