Dados do Trabalho

Título

AVALIAÇÃO DO DESEMPENHO DAS PROTEÍNAS RECOMBINANTES RLCI5 E RLCI2 NO DIAGNÓSTICO DE LEISHMANIOSE VISCERAL HUMANA (ESTUDO DE FASE I)

Introdução

A leishmaniose visceral humana (LVH) é uma doença tropical negligenciada que pode ser fatal em casos tratados inadequadamente ou não tratados, sendo um sério problema de saúde pública. Logo, o diagnóstico deve ser feito de forma precisa e precoce. Diversas técnicas têm sido utilizadas na identificação e utilização de novas moléculas como biomarcadores para diagnósticos. Estudos mostram que antígenos recombinantes podem servir como potente ferramenta sorodiagnóstica para LVH.

Objetivo (s)

Padronizar um ELISA indireto com as proteínas recombinantes Lci5 e/ou Lci2 para detecção de IgG anti-L. infantum em soro humano.

Material e Métodos

O projeto foi aprovado pelo CEP do IGM-FIOCRUZ. Para padronizar o ELISA, foram avaliadas três concentrações de antígenos, anticorpo primário (ac1) e secundário (ac2) para identificação dos melhores parâmetros capazes de diferenciar com maior acurácia pacientes positivos e negativos para LVH. Os ELISAs indiretos seguiram protocolo previamente padronizado com reagentes para adaptação de um kit comercial, sendo: WellChampion™, para estabilização do antígeno na placa e bloqueio da reação, e TMB PLUS2™ para revelação. Curvas ROC foram usadas para avaliar sensibilidade e especificidade, com intervalo de confiança (IC) de 95%.

Resultados e Conclusão

As melhores condições para o ELISA foram determinadas com base na diferenciação entre controles positivo, negativo e branco. Para padronizar a rLci5 adotou-se combinações das condições: antígeno a 0,25μg/mL, 0,50μg/mL, 0,75 μg/mL e 1,0 μg/mL, ac1 a 1:50 e 1:100 e ac2 a 1:20000, 1:40000 e 1:80000. Após avaliação dos resultados, o ELISA foi padronizado com rLci5 em 0,50μg/mL, ac1 diluído em 1:50 e ac2 em 1:40000. A curva ROC das concentrações definidas demonstrou especificidade de 100% (IC95% 84,6-100) e sensibilidade de 100% (IC95% 84,6-100). Para padronizar a rLci2, as combinações adotadas foram antígeno a 0,15μg/mL, 0,30μg/mL, 0,45μg/mL e 0,6μg/mL, ac1 a 1:50 e 1:100 e ac2 a 1:20000, 1:40000 e 1:80000. Após avaliação, o ELISA foi padronizado com rLci2 em 0,60μg/mL, ac1 diluído em 1:50 e ac2 em 1:40000. A curva ROC dos resultados demonstrou 100% de especificidade (IC95% 78,4-100) e 100% de sensibilidade (IC95% 84,6-100). Para avaliação de desempenho das proteínas recombinantes e de reatividade cruzada, serão realizados ELISAs frente a um painel sorológico.

Palavras Chave

leishmaniose; Leishmaniose Visceral; diagnóstico