Dados do Trabalho

Título

Avaliação de duas proteínas de Leptospira interrogans contendo domínios FecR e seu possível papel na interação com moléculas do hospedeiro

Introdução

A leptospirose é uma zoonose de distribuição mundial, causada por espécies patogênicas do gênero Leptospira. Estima-se que essa doença seja responsável por causar 60 mil mortes ao ano. Proteínas presentes na superfície de patógenos são alvos de estudo importantes para entender as relações patógeno-hospedeiro que se estabelecem no decorrer da infecção. Proteínas com domínios FecR estão associadas ao metabolismo do ferro em bactérias, porém já foram caracterizadas como adesinas de L. interrogans, sugerindo o seu envolvimento nas interações patógeno-hospedeiro.

Objetivo (s)

O objetivo deste trabalho foi avaliar as interações das proteínas FecR, LIC10902 e LIC20185, com componentes do hospedeiro.

Material e Métodos

As sequências codificadoras (CDS) dos genes-alvo foram amplificados do genoma de L. interrogans serovar Copenhageni por PCR, clonados no vetor pAE e expressos em Escherichia coli BL21 Star (DE3) pLysS por 16 h a 18 oC. A purificação foi feita por cromatografia de afinidade. A caracterização estrutural foi determinada experimentalmente por dicroísmo circular (DC) e in silico pelo software AlphaFold. Camundongos BALB/c foram imunizados com 3 doses das proteínas recombinantes (PRs) para obtenção de antissoro (CEUAIB: 3572060723). A avaliação da interação entre as PRs e componentes do hospedeiro foram feitas por ELISA.

Resultados e Conclusão

As CDS foram clonadas, expressas e purificadas com sucesso. O DC determinou que ambas as PRs possuem folhas-β como estrutura secundária predominante, sendo um importante componente dos domínios FecR, como demonstrado pelo AlphaFold. As PRs foram imunogênicas, produzindo altos títulos de anticorpos em camundongos BALB/c. Foi observado que a rLIC10902 interagiu com plasminogênio (PLG), fibronectina plasmática e moléculas do complemento, C8 e C9. rLIC20185 interagiu com PLG e C9. As PRs se ligaram ao PLG por meio de seus domínios kringle e permitiram a formação de plasmina na presença de uPA humano. rLIC10902 e rLIC20185 também se ligaram a glicosaminoglicanos e às integrinas αVβ3, α2Bβ3 e α8. Além destas integrinas, rLIC20185 interagiu com α5β1, αVβ8, αVβ6, αVβ5 e αVβ1. Os resultados apontam que as PRs possuem rica estrutura secundária e indicam a formação de uma estrutura terciária bem definida, ambas foram capazes de interagir com diferentes moléculas do hospedeiro, sugerindo um papel nos mecanismos de patogenicidade das leptospiras. No entanto, experimentos adicionais devem ser realizados para confirmar tais hipóteses.

Palavras Chave

Leptospirose; proteínas recombinantes; domínios FecR; leishmaniose