Dados do Trabalho

Título

Avaliação de moduladores de vias de sinalização para tratamento da fibrose cardíaca induzida por T. cruzi in vitro em modelos celulares 2D e 3D

Introdução

A doença de Chagas é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi. A cardiomiopatia crônica é uma de suas formas clínicas e a fibrose é determinante para a patogenia. Há correlação entre o percentual de fibrose e a baixa fração de ejeção ventricular de pacientes com doença de Chagas. Assim, a combinação desta terapia para fibrose com agentes tripanocidas pode melhorar o desfecho clínico. Estudos prévios mostraram ativação das vias DYRK2, AMPK2, NDRG2, JNK, TGF-β e p38 durante a infecção. 

Objetivo (s)

Assim, nos propomos a avaliar atividade anti-fibrótica de inibidores e/ou ativadores dessas vias na modulação da fibrose em modelos celulares 2D e 3D.

Material e Métodos

Foram usados fibroblastos cardíacos (FC) purificados a partir de culturas primárias de cardiomiócitos  (2D) e esferóides de cardiomiócitos e fibroblastos cardíacos (3D). A viabilidade celular após tratamento com os moduladores de quinases LDN 193189 (inibidor de TGF-β e p38), LDN 192960 (inibidor da DYRK2) e GSK621 (ativador da AMPK1) foi avaliada com o kit Cell Titer Glo. A atividade tripanocida foi medida após a infecção com T. cruzi Dm28c-luc (expressando luciferase). Após 72h de tratamento com os compostos, a adição de luciferina permitiu quantificar os amastigotas intracelulares através de luminômetro. A expressão de colágeno em culturas de FC e esferóides infectados por T. cruzi cepa Y e Brazil foi avaliada pela coloração com Sirius Red/Fast Green e quantificação por absorbância.

Resultados e Conclusão

A avaliação dos compostos  quanto à citotoxicidade (CC50) e atividade tripanocida em amastigotas intracelulares (IC50), mostrou para LDN 193189 = CC50 de 8,5 µM e IC50 de 1,79 µM, LDN 192 960 = CC50 de 10,3 µM e IC50 de 3,02 µM e GSK621 = CC50 de 60 µM e IC50 de 7,05 µM. Também foi avaliada sua capacidade de inibição de colágeno, indicando IC50 para inibição no aumento de colágeno induzido por T. cruzi de GSK621 = 1,6 µM, LDN192960 = 2,1 µM e LDN193189 = 0,1 µM.  LDN193189, apesar de mais tóxico, apresentou a melhor janela terapêutica com índice de seletividade (IS) de 85, contra GSK621 com IS de 63 e o LDN192960 com IS de 28. Os mesmos ensaios em modelo tridimensional demonstram que LDN193189 e LDN192960 levaram a uma redução significativa do aumento de colágeno, sem levar a citotoxicidade relevante, enquanto o GSK 7 μM não resultou em inibição de colágeno. Em suma, destacamos que inibidores de DYRK2, TGF-β e p38 apresentam potencial para tratamento da fibrose decorrente da cardiomiopatia crônica decorrente da doença de Chagas.

Palavras Chave

Trypanosoma cruzi; Doença de Chagas; Inibidores de quinases; Microtecido cardíaco 3D