Dados do Trabalho

Título

Expressão e purificação das proteínas recombinantes LIC10507, LIC10508 e LIC10509 de Leptospira interrogans

Introdução

A leptospirose é uma zoonose global que faz parte das doenças tropicais negligenciadas causada por bactérias do gênero Leptospira. Há diversas lipoproteínas de Lepstopira interrogans que são descritas como potenciais fatores de virulência dentres elas estão as proteínas LIC10507, LIC10508 e LIC10509. São proteínas altamente conservadas e que são expressas exclusivamente por cepas patogênicas. Há poucos dados disponíveis sobre o papel dessas proteínas na patogênese de leptospira, porém já foi descrito que são capazes de promover a regulação de fatores de adesão intercelular, se ligar a plasminogênio gerando plasmina, são também reconhecidas pelo soro de pacientes covalescentes e se ligam a componentes de matriz extracelular.

Objetivo (s)

O objetivo desse trabalho foi obter e purificar as proteínas recombinantes LIC10507, LIC10508 e LIC10509.   

Material e Métodos

As proteínas foram clonadas no vetor pAE, as construções foram utilizadas para realizar a transformação por choque térmico de E. coli BL21 (DE3) star pLyS. Após a transformação foi feito sequenciamento para a confirmação da correta transformação. Após a confirmação foram feitas as purificações. Para as proteínas rLIC10507 e rLIC10508 foi utilizado o gradiente de imidazol no sistema Äkta com uma coluna de níquel com afinidade a histidinas. Em seguida foi realizada a diálise. Já a proteína rLIC10509 foi obtida diretamente da fração insolúvel após a  sonicação da cultura da cepa recombinante, também seguida de diálise. A confirmação da presença das proteínas foi verificada por gel de SDS-PAGE seguida de imunoblotting.

Resultados e Conclusão

O sequenciamento demonstrou que as transformações foram eficientes e que os genes estavam no frame correto de leitura com 100% de identidade. As proteínas recombinantes foram expressas na fração insolúvel. As três proteínas foram purificadas com sucesso. Sendo que foi necessário a passagem de duas vezes na coluna das proteínas rLIC10507 e LIC10507 para a obtenção de uma banda única. O imunoblotting demonstrou a identidade das três proteínas mostrando assim a correta purificação. Conclusão: A transformação e purificação foram eficientes para a obtenção das proteínas de interesse, o que proporciona a possibilidade de futuros estudos envolvendo a determinação da função destas proteínas na patogenêse de L. interrogans.  

Palavras Chave

Leptospira Leptospirosis Proteína Recombinante