Dados do Trabalho

Título

Caracterização de uma proteína codificada pelo gene LIC13056 de Leptospira interrogans contendo domínio OmpA

Introdução

A leptospirose é uma zoonose de importância global. Nessa doença, espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira colonizam os túbulos renais dos hospedeiros e são excretadas via urina.  O homem é o hospedeiro acidental das leptospiras e após a infecção pode apresentar diferentes sintomas, dificultando o diagnóstico. Elucidar os mecanismos de patogênese são de grande importância para prevenir a doença. Dessa forma, o estudo de proteínas de membrana externa (OMPs) contendo domínio OmpA pode ser interessante, pois foi observado a participação desse domínio nas interações com o hospedeiro.

Objetivo (s)

Caracterizar funcional e imunologicamente a proteína rLIC13056 de L. interrogans, contendo domínio OmpA.

Material e Métodos

A plataforma NCBI e as ferramentas BLAST e Clustal Omega foram utilizadas para construção de uma árvore filogenética para comparar a conservação do gene LIC13056 entre diferentes espécies de Leptospira. O gene LIC13056 foi clonado no vetor pET-28a e expresso em E. coli C43 por 16 horas a 18ºC. A purificação foi feita por cromatografia de afinidade a metal. A proteína purificada (10 ug) adsorvida em hidróxido de alumínio, foi usada para imunização de camundongos BALB/c para obtenção do soro (CEUAIB-8793301023). A titulação dos soros e a análise da interação com componentes do hospedeiro foram feitas por ELISA.

Resultados e Conclusão

Os resultados obtidos mostraram que o gene LIC13056 é bem conservado entre espécies patogênicas, indicando seu possível envolvimento na virulência das leptospiras. A clonagem, expressão e purificação foram realizadas com sucesso. Animais imunizados com rLIC13056 produziram altos títulos de anticorpos. A rLIC13056 apresentou capacidade de interagir com a integrina α8, plasminogênio (PLG) e com fatores do sistema complemento como C4b, C8, C9 e C4BP de forma dose-dependente e saturável. A proteina rLIC13056 foi capaz de capturar o PLG do soro humano normal e convertê-lo em plasmina. No ensaio de competição utilizando ácido aminocapróico foi observada uma redução da ligação ao PLG, sugerindo que esta ocorre via domínios kringle. A rLIC13056 apresentou um espectro amplo de ligação com diferentes componentes humanos, sugerindo um possível papel durante os processos de infecção no hospedeiro.

Palavras Chave

Palavras-chave: Leptospira interrogans; Leptospirose; proteína recombinante; OMPs; domínio OmpA