Dados do Trabalho

Título

Avaliação de kits comerciais baseados em PCR multiplex em tempo real para diagnóstico de meningite bacteriana

Introdução

A meningite bacteriana (MB) continua como uma ameaça à saúde pública, com elevadas taxas de morbidade e mortalidade. No Brasil, os principais patógenos envolvidos na MB são Neisseria meningitidis (Nm), Streptococcus pneumoniae (Spn) e Haemophilus influenzae tipo b (Hib), responsáveis pela maioria dos casos. O Instituto Adolfo Lutz (IAL) validou uma reação em cadeia da polimerase (qPCR) no formato multiplex in house (mqPCR/IAL) para  detecção de Nm, Spn e Hi em amostras de líquido cefalorraquidiano (CSF), soro e fragmentos de tecido pós-óbito de indivíduos com suspeita de MB e, em 2010 implantou na rotina diagnóstica. O IAL como Laboratório de Referência Nacional (IAL/LRN) para o diagnóstico da MB, descentralizou essa mqPCR aos LACENs de vários estados brasileiros em parceria com a Coordenação Geral de Laboratórios de Saúde Pública da Secretaria de Vigilância em Saúde e Meio Ambiente – Ministério da Saúde (CGLAB/SVSA/MS). No entanto, no Serviço Público há grande dificuldade de aquisição de insumos para diagnóstico molecular in house, em que todos os reagentes são adquiridos separadamente e o emprego de kits comerciais facilita esse processo. No Brasil há três kits com registro aprovado pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Anvisa) voltados ao diagnóstico da MB .

Objetivo (s)

Avaliar o desempenho de três kits comerciais (ALLPLEX™ Meningitis-B Assay/Seegene Inc., Coreia do Sul; VIASURE™ H. influenzae, N. meningitidis & S. pneumoniae; Real Time PCR Detection Kit/CerTest Biotec, Espanha e XGEN™ Multi MB/Mobius Life Science, Brasil) para a detecção simultânea de Neisseria meningitidis (Nm), Streptococcus pneumoniae (Spn) e Haemophillus influenzae (Hi), comparado com o ensaio molecular in house (mqPCR/IAL) para Nm, Spn e Hi

Material e Métodos

No total, 100 amostras clínicas (líquido cefalorraquidiano = 62; soro = 38) foram testadas utilizando-se os três kits comerciais mqPCR, em comparação com o ensaio mqPCR/IAL

Resultados e Conclusão

Das100 amostras, 93 foram positivas para Nm, Spn ou Hi e 7 negativas. Para amostras de DNA-CSF, os resultados dos kits ALLPLEX™, VIASURE™ e XGEN™ apresentaram alta concordância com o ensaio mqPCR/IAL, apresentando mais de 93% de concordância e índice Kappa entre 0,61 e 0,80. Para amostras de DNA-soro, apenas o kit VIASURE™ foi comparado com o ensaio mqPCR/IAL, apresentando 100% de similaridade de concordância e índice Kappa = 1.Todos os três kits provaram ser competentes para detecção qualitativa de Nm, Spn e Hi e podem ser utilizados no diagnóstico de rotina da MB.

Palavras Chave

meningite bacteriana; diagnóstico; PCR em tempo real; kit de reagentes para diagnóstico