Dados do Trabalho

Título

Avaliação comparativa de duas metodologias de PCR para detecção das carbapenemases KPC e NDM

Introdução

A emergência e disseminação de genes de carbapenemases em bactérias Gram-negativas é um grande problema de saúde pública. Atualmente, o método mais acurado para detectar as carbapenemases é a detecção molecular por PCR. As duas técnicas mais empregadas são a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e a PCR em tempo real (q-PCR). A comparação entre essas duas técnicas não apenas avalia seu desempenho, mas também se torna essencial para adaptar as práticas laboratoriais às mudanças nas demandas e na evolução das tecnologias.

Objetivo (s)

Este estudo objetiva realizar uma análise comparativa entre dois protocolos de detecção molecular de KPC e NDM. 

Material e Métodos

Para tanto, examinamos 461 isolados de bactérias gram-negativas, focalizando nos genes blaKPC e blaNDM, distribuídos da seguinte forma: Klebsiella pneumoniae (n=198), Acinetobacter baumannii (n=118), Pseudomonas sp (n=91), Enterobacter cloacae complexo (n=21), Escherichia coli (n=19), Serratia marcescens (n=9) e Citrobacter freundii (n=5). A identificação foi realizada utilizando o equipamento MALDI-TOF e testes bioquímicos. Na PCR tradicional, empregamos Green Master Mix 2x (Promega) em um protocolo multiplex seguida de eletroforese em gel de agarose. Para a qPCR simplex, utilizamos Sybr Green Master Mix (Promega) com amplificação em termociclador 7500Fast (Applied), seguido de análise pela curva de dissociação (curva de melting).

Resultados e Conclusão

No geral, houve detecção de 165 isolados (35,8%) carreando o gene blaKPC e 37 isolados (8,0%) positivos para o gene blaNDM. Houve concordância de 99,9% (921/922 reações realizadas). A única discordância observada foi em um isolado de Serratia marcescens KPC+ detectada apenas por qPCR. A comparação entre PCR tradicional e q-PCR mostrou que as duas técnicas apresentam resultados compatíveis, sendo que a q-PCR forrnece resultados em um intervalo de tempo consideravelmente menor do que a PCR tradicional. 

Palavras Chave

PCR; PCR em tempo real; sybr green master mix; biologia molecular.