Dados do Trabalho

Título

Avaliação de marcadores moleculares expressos nas formas promastigotas metacíclicas de Leishmania (Leishmania) infantum in vitro e in vivo em modelo Lutzomyia longipalpis.

Introdução

As fêmeas de flebotomíneos possuem posição central no ciclo de transmissão dos agentes etiológicos das leishmanioses,  uma vez que é no interior de seu trato digestório que as Leishmania spp. assumem a forma infectiva, metacíclica, em uma relação espécie-específica. A abordagem molecular é eficaz quanto a detecção do DNA parasitário, presente em todas as formas evolutivas do parasito, contudo, não indica infecção ativa por Leishmania sp., assim, não confirma infecção natural.

Objetivo (s)

Neste cenário, o objetivo do trabalho foi identificar marcadores de formas metacíclicas de L. infantum ao longo da metaciclogênese no trato digestório de Lutzomyia longipalpis, buscando desenvolver uma metodologia auxiliar aos estudos de comprovação de competência vetorial de flebotomíneos.

Material e Métodos

Para isso, foi desenvolvida uma RT-qPCR a partir de amostras de L. infantum in vitro e in vivo, com flebotomíneos de colônia infectados e agrupados seguindo diferentes tempos pós-infecção, a fim de avaliar a expressão gênica de potenciais marcadores das formas metacíclicas. Foram selecionados alvos a partir de um painel de transcritos diferencialmente expressos durante a metaciclogênese de L. infantum. Com amostras in vitro, foram analisados diferentes métodos de separação celular  para enriquecimento de metacíclicas, extração de RNA, síntese de cDNA e condições ideais da qPCR.

Resultados e Conclusão

A metodologia foi padronizada utilizando Ficoll-540, Trizol/clorofórmio e SuperScript IV VILO. O ensaio de RT-qPCR demonstrou boa eficiência dos primers para o método ΔΔCt, na concentração de 10pmol e anelamento à 56°C. Foram avaliados 11 pares de primers desenhados pelo grupo, além de dois pares já descritos e genes endógenos. Nos ensaios in vitro, os genes HASPa1, Manosiltransferase, SCGR3, HASPb, SCGR5 e SHERP foram mais expressos pelas formas metacíclicas, enquanto que in vivo se revelaram com maior expressão os genes: HASPa1, SCG4, Manosiltransferase e SCGR3. Ainda assim, são necessários estudos de validação em campo, com espécies putativas de flebotomíneos.

Palavras Chave

Leishmania infantum; metacíclicas; marcador molecular; expressão gênica; competência vetorial