Dados do Trabalho

Título

Identificação e diferenciação molecular de espécies de Leishmania do subgênero Viannia do norte do País, Belém - Pará, Brasil

Introdução

As leishmanioses são um grupo de doenças causadas pelo protozoário do gênero Leishmania sp., transmitidos pela picada de flebotomíneos fêmeas infectadas. O Brasil possui diversidade de espécies, sendo no Pará encontrada a maior variedade, com sete espécies e um parasito híbrido. A biologia molecular tem técnicas altamente específicas e sensíveis, porém necessita tecnologias mais avançadas e costumam ter resultados demorados. O desenho de primers e a bioinformática auxiliam a PCR, maximizando a eficácia da técnica. 

Objetivo (s)

Visa testar os primers Hsp702LI157, Hsp702LI328 e Hsp702NA160 para identificar e diferenciar as espécies Leishmania (V.) lindenbergi, Leishmania (V.) naiffi e Leishmania (V.) guyanensis por PCR RFLP.

Material e Métodos

As promastigotas de Leishmania provenientes do criobanco do laboratório de Leishmanioses do Instituto Evandro Chagas foram cultivadas em meio Novy-MacNeal-Nicolle, extraídas com PureLink™ Genomic DNA Mini Kit. Na PCR convencional foram usados os primers Hsp702LI157, Hsp702LI328, Hsp702NA160 e na PCR-RFLP as enzimas HAEIII e SDUI para a clivagem (37oC por 2 horas e 3 horas respectivamente). 

Resultados e Conclusão

Com a técnica de PCR convencional o par de primers Hsp702LI328 (R2F2) conseguiu diferenciar L. lainsoni das demais espécies de Leishmania e seus produtos após clivagem com as enzimas de restrição permitiram a diferenciação entre L. naiffi e L. guyanensis. O primer Hsp702NA160 (R5F5) não gerou distinção entre as espécies de Leishmania quando se fez uso da PCR convencional e PCR-RFLP. O primer Hsp702LI328 (R2F2) foi capaz de diferenciar L. lainsoni sem a necessidade do uso de enzimas de restrição, e capaz de diferenciar L. naiffi e L. guyanensis com o uso de enzimas de restrição HAEIII e SDUI. O primer Hsp702NA160 (R5F5) apresentou baixa especificidade no que tange a caracterização de espécies de leismanias, mas ainda assim tem valor na identificação do gênero Leishmania.

Palavras Chave

Diferenciação molecular; PCR-RFLP; Enzimas de restrição