Dados do Trabalho

Título

Identificação e diferenciação molecular de espécies de Leishmania do subgênero Viannia do norte do País, Belém - Pará, Brasil

Introdução

<p>As leishmanioses s&atilde;o um grupo de doen&ccedil;as causadas pelo protozo&aacute;rio do g&ecirc;nero Leishmania sp., transmitidos pela picada de flebotom&iacute;neos f&ecirc;meas infectadas. O Brasil possui diversidade de esp&eacute;cies, sendo no Par&aacute; encontrada a maior variedade, com sete esp&eacute;cies e um parasito h&iacute;brido. A biologia molecular tem t&eacute;cnicas altamente espec&iacute;ficas e sens&iacute;veis, por&eacute;m necessita tecnologias mais avan&ccedil;adas e costumam ter resultados demorados. O desenho de primers e a bioinform&aacute;tica auxiliam a PCR, maximizando a efic&aacute;cia da t&eacute;cnica.&nbsp;</p>

Objetivo (s)

<p>Visa testar os primers Hsp702LI157, Hsp702LI328 e Hsp702NA160 para identificar e diferenciar as esp&eacute;cies Leishmania (V.) lindenbergi, Leishmania (V.) naiffi e Leishmania (V.) guyanensis por PCR RFLP.</p>

Material e Métodos

<p>As promastigotas de Leishmania provenientes do criobanco do laborat&oacute;rio de Leishmanioses do Instituto Evandro Chagas foram cultivadas em meio Novy-MacNeal-Nicolle, extra&iacute;das com PureLink&trade; Genomic DNA Mini Kit. Na PCR convencional foram usados os primers Hsp702LI157, Hsp702LI328, Hsp702NA160 e na PCR-RFLP as enzimas HAEIII e SDUI para a clivagem (37oC por 2 horas e 3 horas respectivamente).&nbsp;</p>

Resultados e Conclusão

<p>Com a t&eacute;cnica de PCR convencional o par de primers Hsp702LI328 (R2F2) conseguiu diferenciar L. lainsoni das demais esp&eacute;cies de Leishmania e seus produtos ap&oacute;s clivagem com as enzimas de restri&ccedil;&atilde;o permitiram a diferencia&ccedil;&atilde;o entre L. naiffi e L. guyanensis. O primer Hsp702NA160 (R5F5) n&atilde;o gerou distin&ccedil;&atilde;o entre as esp&eacute;cies de Leishmania quando se fez uso da PCR convencional e PCR-RFLP.</p>

<p>O primer Hsp702LI328 (R2F2) foi capaz de diferenciar L. lainsoni sem a necessidade do uso de enzimas de restri&ccedil;&atilde;o, e capaz de diferenciar L. naiffi e L. guyanensis com o uso de enzimas de restri&ccedil;&atilde;o HAEIII e SDUI. O primer Hsp702NA160 (R5F5) apresentou baixa especificidade no que tange a caracteriza&ccedil;&atilde;o de esp&eacute;cies de leismanias, mas ainda assim tem valor na identifica&ccedil;&atilde;o do g&ecirc;nero Leishmania.</p>

Palavras Chave

Diferenciação molecular; PCR-RFLP; Enzimas de restrição