Dados do Trabalho

Título

A via de degradação de His de Trypanosoma cruzi perturba o consumo de Pro em Trypanosoma brucei

Introdução

O Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da doença de Chagas, que é transmitida por insetos triatomíneos e afeta sete milhões de pessoas em todo o mundo. Como o ciclo de vida de T. cruzi requer um vetor invertebrado e um hospedeiro vertebrado, este parasita tem uma alta adaptabilidade a ambientes diversos. Por exemplo, quando T. cruzi encontra escassez de glicose no hospedeiro invertebrado, ele começa a metabolizar aminoácidos e gerar amônia. A histidina (His) está presente em altas concentrações no intestino do inseto, e o parasita pode usá-la para gerar ATP através de sua conversão em glutamato (Glu). Glu é um metabólito central, que pode ser produzido por outras fontes, como prolina (Pro). A via de degradação de His consiste em quatro etapas enzimáticas, e sequências codificantes para as quatro enzimas estão presentes no genoma de T. cruzi, mas não em Trypanosoma brucei. Para investigar o papel biológico dessa via, geramos linhagens celulares procíclicas de T. brucei capazes de expressar versões ativas das duas primeiras enzimas da via de degradação de His de T. cruzi.

Objetivo (s)

Observar se a expressão da via de degradação de His traz alguma vantagem a um parasita naturalmente carente dessa via.

Material e Métodos

As sequências codificantes e as expressões proteicas de ambas as enzimas foram confirmadas por PCR utilizando DNA genômico (gDNA) e Western Blotting. Avaliamos a proliferação celular ao longo de quatro dias, medimos o consumo de O2 usando um oxígrafo de alta resolução e o conteúdo de ATP usando um ensaio de luminescência.

Resultados e Conclusão

As linhagens celulares mutantes não apresentaram diferenças na proliferação. O conteúdo de ATP foi semelhante ao controle quando His foi usada como única fonte de energia, mas quando Pro foi utilizada como único metabólito, os níveis de ATP diminuíram em comparação com o parasita selvagem. Além disso, His não afetou o consumo de O2, mas o mesmo quando desencadeado por Pro diminui em 15% em comparação com o controle. Utilizando T. brucei como modelo para compreender o metabolismo único de T. cruzi pode trazer informações cruciais sobre o significado funcional da via de degradação de His desse parasita e elucidar sua influência na adaptação de seu metabolismo.

Palavras Chave

Trypanosoma; histidina; prolina; biologia sintética.