Dados do Trabalho

Título

Avaliação da performance de um primer espécie-específico para diagnóstico da infeção de Trypanosoma caninum em cães domésticos

Introdução

A sobreposição das áreas de ocorrências de tripanosomatídeos é um problema relacionado ao diagnóstico acurado desses parasitos. Nas áreas endêmicas de leishmaniose visceral canina (LVC) também é descrita a ocorrência de Trypanosoma caninum infectando os cães domésticos. A PCR utilizando iniciadores moleculares específicos otimizam a identificação do parasito, sendo custo e o tempo inferiores quando etapas de sequenciamento não são necessárias para o diagnóstico final da infecção.

Objetivo (s)

Padronização um primer específico para amplificação da região parcial do gene 18S rDNA de T. caninum.

Material e Métodos

Os primers foram desenhados, com auxílio do programa Primer3Plus, a partir de sequências gênicas depositadas no GenBank/NCBI de espécies do gênero Trypanosoma pertencentes ao clado filogenético de T. caninum: Trypanosoma gilletti (n=10), Trypanosoma pestanai (n=6), Trypanosoma vegrandis (n=10) e Trypanosoma copemani (n=10) e T. caninum (n=10). Foram analisados 2336 sítios em 46 sequências e definida a região específica de T. caninum.  Em todas os testes de padronização, os primers foram utilizados na concentração de 10pmol. Variáveis da padronização do primer: volume do master mix Gotaq/Promega® (entre 8,5 e 12,5ul), temperaturas de anelamento (entre 54-62°C) e concentração de DNA de T. caninum (1, 10 e 100ng). Foram testadas 5 amostras de DNA de isolados de T. caninum obtidos de pele íntegra de cães domésticos do Rio de Janeiro (2), Belo Horizonte (2) e São Paulo (1). Para testar a especificidade do primer foram testadas amostras de DNA de T. cruzi (DTUs TcI, TcII e TcIV), Trypanosoma rangeli, Trypanosoma vespertilionis, Trypanosoma evansi, Leishmania braziliensis e Leishmania infantum.

Resultados e Conclusão

A condição ótima de amplificação do primer foi identificada na temperatura de anelamento de 62°C e um volume de 8,5 µl do master mix. Todas as amostras de DNA de T. caninum demonstraram amplificação em concentrações de 1 a 100 ng. Entretanto, as amostras de DNA de outros tripanosomatídeos testadas não apresentaram amplificação em todas as condições avaliadas. A partir das análises, o par de primer foi considerado específico para o diagnóstico de T. caninum. Nesse contexto, o diagnóstico molecular da infecção de T. caninum, realizado a partir de primers específicos, otimiza a identificação do parasito de forma acurada contribuindo como diagnóstico diferencial da LVC. 

Palavras Chave

Canidae; Trypanosomatidae; Leishmania infantum.