Dados do Trabalho

Título

DESIGN DE FRAGMENTOS DA DINOPONERATOXINA M-PONTX-Dq4e, AVALIAÇÃO DA CITOTOXICIDADE E EFEITO TRIPANOCIDA SOBRE CEPA Y DE Trypanosoma cruzi.

Introdução

Peptídeos antimicrobianos tem sido investigados como ferramentas para o desenvolvimento de compostos anti-Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, cuja terapêutica é limitada quanto à eficácia e toxicidade. Anteriormente, a dinoponeratoxina M-PONTX-Dq4e, proveniente da formiga Dinoponera quadriceps, apresentou efeito em formas tripomastigotas de cepa Y de T. cruzi, porém alta toxicidade em células hospedeiras (LLC-MK2), e baixa seletividade (IS = 3,50), não atendendo aos critérios da OMS (IS > 50) (LIMA et al., 2018). Ademais, do ponto de vista biotecnológico, esse peptídeo com 30 resíduos de aminoácidos é de difícil síntese. 

Objetivo (s)

Desse modo, este estudo objetiva realizar o design e síntese de fragmentos da M-PONTX-Dq4e a fim de gerar moléculas tripanocidas mais promissoras. 

Material e Métodos

Cinco fragmentos {[4-30], [1-22], [11-20], [21-30] e [1-10]} foram desenhados e suas propriedades físico-quimicas [hidrofobicidade (H), momento hidrofóbico (µH) e carga líquida (z)] preditas utilizando os servidores Pepcalc e Heliquest. Os peptídeos foram então sintetizados em fase sólida (Fmoc), purificados e caracterizados. Para avaliação da citotoxicidade, utilizaram-se células LLC-MK2 tratadas durante 24 horas com os fragmentos (100 – 1,56 µM) e submetidas ao ensaio de redução do MTT, sendo estimada a CC50 (concentração capaz de reduzir a viabilidade celular em 50%). A atividade tripanocida em formas tripomastigotas (24 h) foi avaliada por determinação do percentual de parasitos viáveis, em câmara de Neubauer, e estimativa da LC50 (concentração capaz de matar 50% das formas tripomastigotas). Além disso, foi calculado o índice de seletividade (IS = CC50/LC50). Os experimentos foram realizados em triplicata (n = 3), sendo os resultados expressos como média ± EPM e analisados com One-way ANOVA (pós-teste de Dunnet, p<0,05 vs. CT). 

Resultados e Conclusão

Em comparação ao peptídeo parental (H = 0,220; µH = 0,449 e z = +4), as propriedades dos fragmentos tiveram variações: 0,015 – 0,259 (H), 0,293 – 0,659 (µH) e 0 a +3 (z). Todos os peptídeos apresentaram-se menos citotóxicos (CC50 > 100 µM) e mais seletivos (IS > 3,40) sobre o parasito, sobretudo os análogos [1-10] e [4-30]. Dessa forma, pode-se concluir que os fragmentos de M-PONTX-Dq4e são compostos anti-T.cruzi promissores e de fácil síntese. Ademais, podem ser obtidos análogos melhorados a fim de atender os critérios preconizados pela OMS. Os autores agradecem à CAPES, FUNCAP e CNPq pelo apoio financeiro.

Palavras Chave

Trypanosoma cruzi; Dinoponeratoxinas; Peptídeos antimicrobianos; Design racional.