Dados do Trabalho

Título

Comparação da sensibilidade de diferentes ensaios de PCR em Tempo Real para detecção de Leptospiras patogênicas em diversos tipos de amostras clínicas

Introdução

A leptospirose é uma doença tropical negligenciada causada pela bactéria Leptospira Interrogans, transmitida e disseminada através da urina de animais infectados, especialmente roedores, contaminando solo e água de enchentes. Seus sintomas variados se assemelham a outras doenças tropicais, como dengue e hepatites virais, o que dificulta seu diagnóstico. Enquanto os testes sorológicos, considerados padrão ouro, são realizados após sete dias de sintomas, a PCR em tempo real permite a detecção da infecção desde o primeiro dia de sintoma.

Objetivo (s)

Comparar a sensibilidade de diferentes conjuntos de primers e sondas (ensaios) para detecção específica de Leptospiras patogênicas a humanos por PCR em tempo real, e avaliar a sensibilidade da reação em diferentes tipos de amostras clínicas.

Material e Métodos

Foi utilizado um repique do meio de cultura semi-sólido EMJH de Leptospira interrogans com concentração de 108/mL, a partir do qual foi realizada diluição seriada 1:10 em PBS até a concentração de 10 bactérias/mL. O mesmo foi feito em amostras de soro, plasma, sangue total, urina e líquor coletadas de pacientes sem evidência clínica ou laboratorial de leptospirose. O DNA foi extraído com kits comerciais e submetido à PCR em tempo real utilizando o sistema TaqMan. Foram testadas diluições de bactérias em PBS com quatro ensaios de primers e sondas diferentes (A, B, C e D) para selecionar o de melhor performance, utilizado para avaliar a sensibilidade da reação nas amostras clínicas. Estudo aprovado pelo comite de ética, CAAE 68453623.0.1001.0068.

Resultados e Conclusão

Os ensaios C e D foram de melhor sensibilidade, detectando todas as concentrações de bactérias testadas. No entanto, o ensaio C mostrou maior eficiência e foi aplicado para avaliação da sensibilidade da reação para detecção de Leptospiras nas diferentes tipos de amostras clínicas. Observamos uma sensibilidade consistente em todos os tipos de amostras testadas, sendo possível detectar baixas concentrações de bactérias em todas as amostras analisadas. Este estudo demonstra que a PCR em tempo real é eficaz na detecção de Leptospira em amostras com baixa concentração de DNA bacteriano, utilizando um ensaio específico para Leptospiras patogênicas a humanos. A técnica se mostrou eficiente em diversos tipos de amostras clínicas, o que confirma sua utilidade para o diagnóstico da leptospirose, tanto na fase precoce quando há bacteremia, quanto na fase tardia, quando não há mais bactérias circulantes, mas estas ainda são excretadas na urina devido à colonização renal.

Palavras Chave

Leptospirose; Diagnóstico Precoce; PCR; Humana