Dados do Trabalho

Título

Avaliação do desempenho de ensaios de PCR quantitativo para o diagnóstico da infecção por Leishmania infantum em seus diversos hospedeiros

Introdução

A leishmaniose visceral é uma doença causada pelo parasito do gênero Leishmania, envolvendo duas especies, L. infantum e L. donovani, que circulam de maneira dispersa por vários continentes. Sua manifestação clínica se caracteriza pelo acometimento de órgãos internos, como baço, fígado e medula óssea, podendo levar o paciente a óbito caso não ocorra um diagnóstico precoce e tratamentos específicos. Atualmente, o diagnóstico se baseia no exame parasitólogico direto. Apesar da sua alta especificidade, a sensibilidade deste exame varia em função de diversos fatores, como, por exemplo, o tecido avaliado. Nos testes rápidos, há variações de sensibilidade e especificidade de acordo com o fabricante, tipo de amostra e estágio da infecção.

Objetivo (s)

Visto a necessidade de um método de diagnóstico que possua alta especificidade e sensbilidade simultaneamente, o nosso projeto visa a validação de uma PCR quantitativa (qPCR) multiplex para o diagnóstico da leishmaniose visceral humana e canina, onde serão avaliados parâmetros como extensão dinâmica, limite de detecção, limite de quantificação, sensibilidade, especificidade, precisão e acurácia. Nesta validação, estão sendo utilizadas amostras de sangue, linfonodo e medula óssea de humanos e de cães contaminadas artificialmente com diferentes cepas de L. infantum e L. donovani, circulantes em diferentes áreas endêmicas nas Américas.

Material e Métodos

Para avaliar a sensibilidade da metodologia, amostras de sangue de cães saudáveis foram contaminadas artificialmente com 5 cepas distintas de L. infantum e 3 cepas distintas de L. donovani. As concetrações de parasito utilizadas no ensaio foram de 5 parasitos/mL, 1 parasito/mL e 0,5 parasitos/mL. As amostras foram extraídas e em seguida foram realizados ensaios de qPCR, utilizando o alvo em Leishmania (18S rDNA ou HSP70) e um controle interno canino (HPRT).

Resultados e Conclusão

Destas, para o alvo 18S rDNA, foi possível detectar o DNA de L infantum e L. donovani até a concentração de 5 parasitos/mL de sangue, em 6 das 8 cepas testadas. Isto corresponde a 6×10-3 parasitos/reação, o que demonstra a elevada sensibilidade desta metodologia. Além disso, o alvo HPRT canino apresentou amplificação com um CT médio de 21 para todas as amostras testadas, funcionando como um controle interno da reação. A validação desta metodologia contribuirá para o avanço do diagnóstico e desenvolvimento de produtos para a leishmaniose visceral do novo e velho mundo.

Palavras Chave

Leishmaniose Visceral; PCR quantitativo; 18S; HSP70; HPRT.