Dados do Trabalho

Título

Avaliação da técnica “Loop-mediated isothermal amplification” (LAMP) em amostras obtidas de swab de lesão cutânea ulcerada frente às técnicas convencionais de diagnóstico para leishmaniose tegumentar americana em pacientes atendidos em centro

Introdução

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença infecciosa parasitária causada por protozoários flagelados pertencentes ao gênero Leishmania.

Objetivo (s)

O objetivo deste estudo é avaliar a técnica de LAMP para diagnóstico da LTA em amostras clínicas obtidas a partir de swab de lesão cutânea comparado ao fluxo de diagnóstico de rotina em pacientes atendidos no ambulatório do INI/Fiocruz, no período de 2021 a 2024.

Material e Métodos

Duas técnicas de LAMP estão sendo avaliadas, mix comercial WarmStart® (WS) e associação da enzima Bst 2.0 DNA Polymerase com SYBR® Green I para revelação (BST+SybrGreen) em amostras de swab extraídas por kit comercial (SK) e por fervura (SF) com primers para a região 18S rRNA gene (Nzelu et al., 2014). Até o momento foram incluídos 88 pacientes elegíveis para o estudo atendidos no ambulatório do LaPClinVigileish-INI. Destes, dentre os pacientes do grupo controle, ou seja, que possuem diagnóstico final diferente de leishmaniose, observamos a maioria dos pacientes com esporotricose (49%). Alguns deles ainda não possuem verificação do desfecho.

Resultados e Conclusão

Até o momento foram testadas 86 amostras de SK utilizando o WS, 61 amostras de SK utilizando BST+SybrGreen, 57 amostras de SF utilizando o WS e 57 amostras de SF utilizando BST+SybrGreen, todas testadas em duplicata. Os resultados parciais de sensibilidade (S) e especificidade (E) dos ensaios frente aos testes de referência para LAMP foram S de 38,24% e 82,61%; E de 94,29% e 78,57% para amostras de SK e realizadas por WS e BST+SybrGreen respectivamente. Para as amostras SF os resultados de S foram 35% e 55% e E de 63,33% e 96,67% por WS e  BST+SybrGreen respectivamente. Comparativamente, a cPCR utilizada na rotina diagnóstica apresentou resultados de 81,5% de S e 100% de E em amostras clínicas coletadas por biópsia dos mesmos pacientes do estudo. Concluímos que até o momento a melhor indicação da técnica de LAMP utilizando este primer foi a extração do DNA por kit comercial e a revelação da técnica por Sybr Green no diagnóstico da LT. Os resultados encontrados até o momento se aproximam dos achados na literatura para este primer (S80% e E100%) e por utilizar material biológico coletado de forma menos invasiva, não exige estrutura laboratorial complexa bem como equipe médica especializada para realização.  

Palavras Chave

Leishmaniose tegumentar americana; biologia molecular; LAMP.