Dados do Trabalho

Título

Atividade do derivado peptídico ctn[15-34] frente às formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi

Introdução

Segundo dados da Organização Mundial de Saúde na América Latina cerca de 6-7 milhões de indivíduos convivem com a infecção por Trypanosoma cruzi. Como principais dificuldades encontradas no combate a essa infecção, encontra-se a falta de eficácia dos tratamentos na forma crônica da doença. Nesse contexto, a triagem de compostos bioativos vem se destacando como uma alternativa viável de otimização de terapias. Dentre os compostos têm-se a fração peptídica do veneno da serpente Crotalus durissus terrificus (cascavel), o ctn[15-34] que demonstrou seu potencial antibacteriano e ausência de toxicidade.

Objetivo (s)

o trabalho teve como objetivo realizar a triagem do derivado peptídico ctn[15-34] frente às formas epimastigotas de T. Cruzi.

Material e Métodos

As formas epimastigotas foram semeadas em meio LIT até atingir concentração de 1x106  células/mL e foram tratadas a uma concentração de 100 μM do peptídeo durante 24 horas. Posterior ao cultivo, as células foram lavadas com PBS e marcadas com 5 μL de Iodeto de Propídeo (IP) e 5 μL de Anexina V, sendo incubados durante 15 minutos no escuro. Após incubação, as mesmas foram levadas ao citômetro de fluxo FACSCALIBUR (BD Biosciences, NJ, EUA). Realizamos também a avaliação de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) a partir da aplicação de 10 μL do marcador DCFH-DA. Para todos os testes, um grupo controle sem tratamento foi utilizado. Para as análises estatísticas foi utilizado o teste de D’agostino para verificação da normalidade, em caso positivo as comparações eram realizadas pelo Two-way ANOVA seguido por Bonferroni e em negativo pelo teste de Mann-Whitney U. O valor de significância adotado foi p<0.05 e as estatísticas geradas pelo Graphpad PRISMA (versão 6). 

Resultados e Conclusão

O peptídeo ctn[15-34] mostrou uma redução do percentual de viabilidade dos parasitos quando comparado ao grupo controle (60.82%; 99.22%; p<0.05). Além disso, a marcação com IP foi significativamente elevada em relação ao grupo controle (26.24%; 0,24%, p<0.05) indicando uma possível necrose como causa da morte celular. O tratamento com 100 μM do peptídeo levou ao aumento na intensidade de fluorescência do marcador DCFH-DA indicando elevação da produção de EROs quando comparado ao grupo controle (3,97±0.04; 1,21±0.07). Esses dados corroboram que o derivado peptídico ctn[15-34] pode vir a exibir uma potencial atividade frente às cepas de T. cruzi, contudo, mais estudos devem ser realizados a fim de garantir sua segurança bem como sua concentração ideal como terapia.

Palavras Chave

Toxinas de serpentes; Peptídeos catiônicos; T. cruzi; Necrose