Dados do Trabalho

Título

Avaliação de métodos de conservação e transporte de medula óssea para diagnóstico de Leishmaniose Visceral Humana

Introdução

A PCR para detecção de DNA de Leishmania em amostras de medula óssea (MO) tem sido cada vez mais utilizada no diagnóstico da leishmaniose visceral humana (LVH). A punção de MO é um procedimento invasivo, doloroso e o material obtido deve ser processado no prazo, que foi determinado de maneira empírica, de até 24 horas. Entretanto, em muitos casos, não é possível o envio do material no tempo determinado, impossibilitando a realização do exame. Para pacientes em estado grave, a perda desse material pode ter um impacto significativo no desfecho do caso. Os protocolos utilizados nos laboratórios de referência devem ser validados e não existem dados disponíveis sobre prazo ou desempenho de métodos de conservação de MO para testes moleculares no diagnóstico da LVH.  

Objetivo (s)

O objetivo é avaliar diferentes métodos e tempos de conservação de amostras de MO para diagnóstico molecular de LVH.    

Material e Métodos

Serão utilizadas amostras de MO enviadas para diagnóstico de LVH para o Laboratório de Pesquisa Clínica e Vigilância em Leishmanioses e Laboratório Interdisciplinar de Pesquisas Médicas. As amostras serão processadas utilizando os seguintes métodos e tempos de conservação: RNA later® (168 horas), FTA card® (168 horas), congelamento à -20ºC (168 horas) e refrigeração à 4ºC (24, 48, 96, 120 e 168 horas). Será realizada a extração do DNA, a quantificação do DNA total obtido por métodos espectrométricos e fluorimétricos e a análise da integridade do DNA por eletroforese. Posteriormente, será utilizada a PCR quantitativa (qPCR) para determinar a concentração e integridade do DNA para cada método de conservação. Esse estudo foi aprovado pelo CEP do IOC e do INI sob o CAAE 76150423.7.0000.5248.    

Resultados e Conclusão

Até o momento foram analisadas 25 amostras, sendo 6 positivas, e o DNA de Leishmania foi detectado em até 1 semana após a coleta nas amostras conservadas à -20ºC e 4ºC. Em relação às amostras em RNA later®, só foi possível detectar DNA de Leishmania em 66,7% das amostras. Por fim, a conservação em FTA card® foi a que teve pior desempenho, com concentrações de DNA indetectáveis pela qPCR. Os resultados preliminares apontam como melhores métodos para conservação de amostras de MO a conservação à -20ºC e 4ºC. Tais métodos permitiram a realização do diagnóstico com eficácia e segurança em até 1 semana após a coleta. É necessária a finalização de todas as análises para a eleição do método mais adequado.     

Palavras Chave

leishmaniose visceral humana; diagnóstico; PCR.