Dados do Trabalho


Título

Aspectos biológicos do cultivo combinado de genotipos de L. Infantum co-circulantes no Brasil

Introdução

Leishmania infantum é um protozoário parasita não nativo, importado durante o período de colonização europeia. Através de um estudo de associação genômica ampla, encontramos uma deleção genômica de 12Kb no chr31 que engloba importantes genes para a biologia do parasita. A ampla e frequente distribuição destas cepas mutantes (DEL), pode representar um reflexo adaptativo às condições ecológicas do Brasil. Sabemos que os genótipos Del e NonDel co-circulam, inclusive com ocorrência de híbridos. Portanto, estes parasitas interagem em diferentes momentos do ciclo de transmissão, tanto na colonização do vetor quanto nos hospedeiros, incluindo seu principal reservatório, o cão doméstico.

Objetivo (s)

Testar a hipótese de influências mútuas na biologia e no crescimento dos parasitas Del vs NonDel através de cultivos combinados em condições variáveis. Para isso, será analisado o impacto do cultivo in vitro combinado de parasitas com genótipos Del e NonDel através da quantificação das duas cepas utilizando ferramenta de qPCR desenvolvida para este fim, determinação de viabilidade e de expressão gênica de alvos envolvidos na nutrição e infectividade.

Material e Métodos

A técnica de qPCR foi padronizada através de um ensaio de sensibilidade utilizando diluição seriada de cepa NonDel combinada com quantidades constantes de DEL. Primers e sondas (sistema Taqman) foram utilizados para os alvos 2330 (gene constitutivo de Leishmania infantum) e 2380 (região deletada). Curvas-padrão com as cepas Del NonDEL para os dois alvos foram obtidas para a quantificação relativa dos genótipos. Essa metodologia será aplicada no ensaio de curva de crescimento das cepas em condição de cultivo combinado em meio Schneider suplementado, com um inóculo com 50% de cada genótipo, a cada 24h. Serão preparadas massas parasitárias em cada ponto para isolamento de DNA e qPCR visando a quantificação relativa dos parasitas de cada cepa.

Resultados e Conclusão

O teste de sensibilidade nos possibilitou quantificar cada um dos genótipos em amostras de massas parasitárias artificialmente combinadas por diluição seriada. A partir da metodologia estabelecida e dados axênicos obtidos seremos capazes de expandir esse estudo não só para as amostras in vitro como também para amostras clínicas e para o vetor onde há coinfecção.

Palavras Chave

Leishmania infantum; Leishmaniose Visceral; coinfecção

Área

Eixo 06 | 2.Protozooses humanas e veterinárias - Leishmaniose

Prêmio Jovem Pesquisador

4.Não desejo concorrer

Autores

Camilly Enes Trindade, Monique Florêncio da Silva, Laura Aragão, Caroline Iulianelli Alonso, Marne Coimbra Batalha Chagas, Caroline Batista Marques de Souza, Elisa Cupolillo, Mariana Côrtes Boité