Dados do Trabalho

Título

Detecção de DNA de Trypanosoma cruzi em Açaí Contaminado: Padronização de Protocolos de Extração e de PCR em Tempo Real para Implementação no LACEN/MG

Introdução

A doença de Chagas (DC), causada pelo Trypanosoma cruzi, é uma doença negligenciada com opções de tratamento limitadas, especialmente em sua fase crônica. No Brasil, a transmissão oral do T. cruzi tem ganhado significância devido ao consumo de alimentos, como açaí e caldo de cana, contaminados com o inseto triatomíneo, popularmente conhecido como barbeiro, ou suas fezes infectadas. Embora a manifestação aguda da DC por alimentos contaminados seja mais evidente, muitos pacientes permanecem assintomáticos, desenvolvendo complicações cardíacas e/ou digestivas ao longo do tempo. 

Objetivo (s)

Sendo assim, vê-se a relevância de detectar o T. cruzi em alimentos e minimizar os impactos da DC na população. Para viabilizar a implementação do monitoramento deste parasito em açaí pelo LACEN-MG, esta pesquisa visou padronizar a extração de DNA do parasito e sua detecção por PCR em tempo real nesta matriz. 

Material e Métodos

Para tanto, inicialmente amostras de T. cruzi foram cultivadas e curvas padrão estabelecidas a partir do açaí infectado artificialmente. A extração de DNA e a detecção por PCR em tempo real foram avaliadas comparativamente em três protocolos. Diferentes primers foram testados quanto à eficiência e limite de quantificação, utilizando as químicas TaqMan e SybrGreen. 

Resultados e Conclusão

Em geral, os três protocolos foram considerados aplicáveis, com o SybrGreen mostrando maior sensibilidade para detecção de DNA do que o TaqMan. No entanto, o SybrGreen resultou em algumas amplificações inespecíficas, provavelmente pela formação de dímeros - um problema não encontrado com o TaqMan devido à sua especificidade baseada em sondas, apesar de sua menor sensibilidade. Consequentemente, as estratégias de monitoramento para T. cruzi em açaí deverão inicialmente empregar o SybrGreen, sendo usado o TaqMan para testes confirmatórios quando aplicável. Em adição, foi validada a quantificação relativa pelo método delta Ct comparativo, utilizando SybrGreen, para duas unidades de tipagem distintas (DTUs), Cepa Colombiana (DTU-I) e Cepa Y (DTU-II). O limite de detecção observado foi de 0,02 parasitos/mg de açaí. A implementação desta metodologia possibilitará o monitoramento de T. cruzi em açaí pelo LACEN-MG, propiciando avaliações da qualidade do produto em Minas Gerais e outros estados brasileiros conforme demandas de órgãos fiscalizadores e fornecendo dados sobre os riscos de contaminação neste alimento. Isso auxiliará as ações de Vigilância em Saúde, podendo impulsionar um monitoramento contínuo, se necessário.

Palavras Chave

Trypansoma cruzi; açaí; vigilância molecular; qPCR; Doença de Chagas